蛋白质纯化试剂GST标签纯化树脂（GST Resin）
货号 ：P2020
规 格 ：5ml/10ml
保存 ：4℃保存，有效期少一年

产品简介 ：
    pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合， 因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。
    GSTs 是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于 GST 对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对 GST 及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合 GST 融合蛋白。树脂用 3mol/L NaCl 的缓冲液再生。
    谷胱甘肽琼脂糖对 GST 融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合 8 毫克融合蛋白） 。
 

特性:
粒度：45-165um 流速：75cm/h
工作 PH:4-10 耐压:0.3Mpa
载量:＞5mg 谷胱甘肽 S-转移酶

使用说明 ：
谷胱甘肽树脂的处理:
    1.轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
    2.取部分匀浆放入 15ml 聚丙烯管（每 100ml 细菌培养物大约需要 2ml 匀浆） 。
    3.4℃ 500 g 离心 5 分钟，小心去掉上清。
    4.在树脂中加入 10 倍柱床体积预冷的 PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500 g 离心 5 分钟，小心去掉上清。
    5.每毫升树脂加入 1 毫升冷的 PBS，制成 50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。

制备细胞抽提物 ：
    6.每 100 毫升培养物的细胞沉淀重悬于 4mlPBS 缓冲液中。
    7.加入溶菌酶终浓度为 1mg/ml,冰上放置 30 分钟。
    8.用针筒将 10ml 浓度为 0.2%的 TritonX-100 强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase 和 RNase 终浓度 5ug/ml, 4℃振动温育 10 分钟，4℃ 3000 g 离心 30 分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入 DTT 终浓度1mmol/L。纯化融合蛋白：
    9.细胞裂解物与适量 50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每 100 毫升细菌培养物加 2ml 树脂，于室温轻摇 30min。
    10.混合物于 4℃以 500 g 离心 5 分钟，小心去掉上清并留样少许进行 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。
    11.沉淀中加入 10 倍柱床体积的冷的 PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。
    12.4℃以 500 g 离心 5 分钟，小心去掉上清并留样少许进行 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。
    13.重复步骤 11 和 12 两次。
    14.结合的 GST 融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱， 也可用凝血酶、 肠激酶或 Xa 因子切割， 释放靶蛋白。用谷胱甘肽洗脱融合蛋白 ：
    a.沉淀中加入 1 倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动 10min，洗脱树脂上结合的蛋白。
    b. 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移新管中。
    c.重复步骤 a 和 b 两次，合并 3 次上清。

蛋白酶解从结合的 GST  融合蛋白上回收靶蛋白 ：
    a.  在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择） ，每 ml树脂加入 50 单位溶于 1mlPBS 的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2—16 小时。用小规模实验确定时间。
    b.4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心移新管中。 （GST 仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）
   15.10% SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。

试剂配制：
谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L 还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl (pH8.0)

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